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荧光显微镜的几种荧光光源
点击次数:1179 更新时间:2017-05-17
   荧光显微镜的几种荧光光源
  荧光显微镜是细胞生物学的基本工具。它是由光源、滤色片和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大观察标本的荧光图像而实现对荧光样品的定性定量研究。
  激发、滤光、成像、淬灭,荧光实验的调整就是怎么才能协调好以上因素得到的效果,一个常被忽视的方面是光源的使用,荧光显微镜的常用光源都是白光光源:高压汞灯和氙灯,现在还新出了金属卤素灯和LED。
  1、汞灯
  超高压汞灯(50-200W),它是用石英玻璃制作,中间呈球形,内充一定数量的汞,工作时由两个电极间放电,引起水银蒸发,球内气压迅速升高,当水银*蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。
  2、氙灯
  氙灯和汞灯做为白光源,都能提供从紫外到近红外一系列波长的光,但它们却有着不同的激发光谱。汞灯集中在近紫外、蓝光以及绿光附近,这种在峰值的高激发能量确保产生明亮的荧光信号,但光毒性却很强。因此,HBO用来对固定样品或弱荧光成像。相比而言,氙灯光源的激发比较平缓,可以用于不同波长间强度的比较,例如用于钙离子浓度测量等。氙灯的强激发在近红外800-1000nm。
  3、金属卤素灯
  这是近年来出现的一种光源,它和汞灯的激发光谱很像,但它和显微镜以光纤相连,能散热,寿命更长。光纤从光源连到显微镜上,可以大量减少光产生的热能。金属卤素灯对活细胞成像的另一个优势是内置强度设计装置,可以容易调节激发光。
  4、近来,还出现了一种新的荧光光源:LED,这种光源的开关在毫秒间,减少样品在光照下的暴露时间,延长寿命。另外,LED光的衰减即快又,长期活细胞试验下可大大减少光毒性。和白光相比,LED仅仅在一个较窄的光谱激发,多个LED波段使得LED光源能为多色荧光提供应用。

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