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显微镜荧光光源是生命科学研究中必备的重要工具
点击次数:372 更新时间:2023-06-26
  一、引言
  显微镜荧光光源是生命科学研究中必备的重要工具,其可以通过特定波长下激发物质产生可见或近红外光来实现对细胞和分子结构的观察。本文将介绍该技术的原理及常用类型。
  二、技术原理
  显微镜荧光光源基于量子力学和电动力学等物理学原理,利用高能量的紫外线或蓝色LED激发某些化合物从基态跃迁到激发态,并在退回基态时放出比吸收时更长波长、较弱强度且颜色不同于入射波的荧光。这种现象被称为“斯托克斯位移”,即入射能量低于出射能量。
  三、常用类型
  1. 氙灯:氙灯是一种非常亮且稳定的白炽灯,在多个波段下都有很好表现,适合与滤镜组合使用以提供透过样品所需要之特定波段;但由于使用寿命相对较短并存在明眼刺激问题而已得到了渐渐淘汰。
  2. 汞气灯:汞气灯是一种非常明亮的荧光光源,其在紫外波段下产生很强的激发能量,可用于多个荧光染料的激发。但由于含有汞元素具有毒性和环保隐私等问题而已逐步遭到淘汰。
  3. LED 光源:LED 光源因为体积小、功耗低、使用寿命长以及照射稳定性好而受到广泛应用。其中蓝色 LED 通过配合相应滤镜可以输出特定波长处需要的入射波长,从而实现显微观测。
  4. 激光扫描共聚焦显微镜(LSCM):LSCM系统包括一个或几个连续或脉冲放大器、超快调Q模式锁定器、高效能半导体二极管激光和相关控制电子设备,主要用于三维成像与表面分析领域中对样品进行荧光标记并直接利用反射率变化来依据坐标数据得到新型组织结构信息。
  四、使用效果
  1. 高质量成像: 显微镜荧光技术可以提供更高质量和更详细的成像效果,使研究者能够更清晰实现对分子和生物结构的观察。
  2. 不同探测模式:显微镜荧光技术支持各种不同探测模式。例如在GFP(绿色荧光蛋白)上通过利用激发波长为488nm的氩离子激光进行直接表达所需信号得出高质量动态影像。
  3. 高灵敏度: 显微镜荧光技术具有极高的灵敏度,可以检测到非常低浓度或小尺寸样本中存在的分子和结构,并提供在其他成像方法下难以看到或完全无法看到之数据信息。
  4. 应用范围广泛: 显微镜荧光技术已经被广泛应用于生命科学、医学等领域,在细胞生物学、遗传学、神经科学、肿瘤研究等方面都有着重要地位。

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